分光光度計(jì)的準(zhǔn)確度通常在吸光度(A,Absorbance)0.2至0.8之間最高。這個(gè)范圍也常被稱為“線性范圍”或“最佳測(cè)量范圍”。
在這個(gè)范圍內(nèi),吸光度與樣品濃度之間遵循比爾-朗伯定律(Beer-LambertLaw),即吸光度與濃度成正比,與光程長(zhǎng)度成正比。這意味著在這個(gè)吸光度范圍內(nèi),分光光度計(jì)能夠提供準(zhǔn)確、可靠的濃度測(cè)量結(jié)果。
選擇合適的吸光度范圍進(jìn)行測(cè)量非常重要,原因如下:
1、避免非線性效應(yīng):在吸光度低于0.2時(shí),由于信號(hào)較弱,測(cè)量結(jié)果容易受到噪音影響,導(dǎo)致準(zhǔn)確度下降。在吸光度過(guò)高,如大于1.0時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)飽和效應(yīng),即吸光度不再與濃度成線性關(guān)系,導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果失真。
2、提高靈敏度和準(zhǔn)確度:在0.2至0.8的吸光度范圍內(nèi),由于遵循比爾-朗伯定律,測(cè)量結(jié)果的靈敏度和準(zhǔn)確度高,能夠提供可靠的濃度數(shù)據(jù)。
3、便于校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)化:標(biāo)準(zhǔn)曲線通常也是在這一吸光度范圍內(nèi)建立的,這有助于進(jìn)行準(zhǔn)確的校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)化,確保測(cè)量結(jié)果的一致性和可比性。
因此,在使用分光光度計(jì)進(jìn)行樣品測(cè)量時(shí),應(yīng)盡量調(diào)整樣品濃度或光程長(zhǎng)度,使吸光度落在0.2至0.8之間,以確保獲得準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果。如果樣品的吸光度過(guò)高,可以通過(guò)適當(dāng)稀釋樣品來(lái)降低吸光度;如果吸光度過(guò)低,則可能需要增加樣品濃度或使用更長(zhǎng)的光程長(zhǎng)度。